Plasmide CRISPR d'Activation (r) EGR1: sc-437290-ACT

EGR1 (early growth response 1) est un facteur de transcription à doigts de zinc de type « immédiat-précoce » qui couple rapidement, dans les cellules de rat, des signaux extracellulaires à des programmes d’expression génique. Il est induit en aval des voies MAPK/ERK, de la PKC et de la signalisation dépendante du calcium, et régule des processus tels que la prolifération, la différenciation, la plasticité synaptique, les réponses angiogéniques et l’adaptation au stress, via un contrôle transcriptionnel dépendant du contexte. L’activité d’EGR1 s’intègre à des réseaux associés à AP-1/NF-κB et peut remodeler la chromatine et les états transcriptionnels après une stimulation par des facteurs de croissance ou une lésion. Une expression dérégulée d’EGR1 a été associée dans la littérature à l’inflammation, à la fibrose, au remodelage vasculaire et à des programmes transcriptionnels liés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation génique sensible aux stimuli.

EGR1 Le plasmide d'activation CRISPR (r) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EGR1 Le plasmide d'activation CRISPR (r) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EGR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EGR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EGR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.