Plasmide Double Nickase (h) Egr-3: sc-401740-NIC

EGR3 code le facteur de transcription à doigts de zinc Egr-3, produit d’un gène de réponse immédiate induit par divers signaux extracellulaires et par une signalisation dépendante de l’activité. Egr-3 régule des programmes transcriptionnels sensibles aux stimuli qui influencent la différenciation cellulaire, la prolifération et les réponses adaptatives, en intégrant des voies en aval de MAPK/ERK et de la signalisation dépendante du calcium afin de remodeler l’expression génique. Dans les systèmes nerveux et immunitaire, Egr-3 contribue à la plasticité induite par l’activité et aux programmes fonctionnels des lymphocytes, reliant le contrôle transcriptionnel aux états d’activation cellulaire. Une expression dérégulée d’EGR3 a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux ainsi qu’à une régulation immunitaire altérée, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques des réseaux de gènes couplés aux stimuli.

Egr-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EGR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EGR3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EGR3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EGR3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.