Plasmide Double Nickase (h) Egr-2: sc-401203-NIC

EGR2 code pour Egr-2, un facteur de transcription à doigts de zinc rapidement induit par des signaux extracellulaires, qui programme les décisions de destinée cellulaire et des réponses transcriptionnelles durables. Dans les cellules humaines, Egr-2 régule des réseaux de gènes impliqués dans le développement des nerfs périphériques et la myélinisation, la différenciation et la tolérance des cellules immunitaires, ainsi que le remodelage transcriptionnel dépendant de l’activité. Il s’articule avec la signalisation des gènes de réponse immédiate pilotée par MAPK/ERK et module l’état de la chromatine ainsi que l’occupation des promoteurs sur des cibles spécifiques de lignée. Une activité déréglée d’EGR2 et des programmes transcriptionnels en aval altérés ont été associés à des neuropathies héréditaires et acquises, ainsi qu’à des dysfonctions immunitaires, soulignant sa pertinence pour des études mécanistiques de la régulation génique neuro-immunitaire.

Egr-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EGR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EGR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EGR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EGR2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.