EGFR Lentiviral Activation Particles (m): sc-420131-LAC

Das murine Egfr kodiert den epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR), eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die Proliferation, Überleben, Migration und Differenzierung durch ligandeninduzierte Dimerisierung und Autophosphorylierung reguliert. EGFR signalisiert über die kanonischen MAPK/ERK-, PI3K–AKT–mTOR-, JAK/STAT- und PLCγ–PKC-Signalwege und koordiniert so Zellzyklusprogression und Stressantworten. In Mausmodellen stört eine veränderte EGFR-Aktivität die epitheliale Homöostase und Entwicklungsprogramme und wird häufig genutzt, um fehlregulierte Wachstumssignale zu untersuchen, die für onkogene Transformation und Gewebe-Remodelling relevant sind. EGFR-abhängige Netzwerke überschneiden sich zudem mit endozytotischem Trafficking, Feedback-Inhibition und Crosstalk mit anderen RTKs, wodurch Egfr einen zentralen Knotenpunkt für das Pathway-Mapping darstellt.

EGFR Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Egfr-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

EGFR Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Egfr-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen EGFR-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Egfr-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.