Particules Lentivirales d'Activation (h) EGFR: sc-400015-LAC

Le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR) est une tyrosine kinase réceptrice humaine qui régule la prolifération, la survie, la migration et la différenciation des cellules épithéliales via une dimérisation induite par le ligand et une autophosphorylation. Une fois activé, l’EGFR mobilise des cascades de signalisation clés, notamment RAS–RAF–MEK–ERK, PI3K–AKT–mTOR, JAK–STAT et PLCγ–PKC, coordonnant des programmes transcriptionnels et le contrôle du cycle cellulaire. Une régulation stricte de l’abondance et de l’activité de l’EGFR est assurée par l’endocytose, l’ubiquitinylation et des boucles de rétro-inhibition, afin d’équilibrer les signaux de croissance avec l’homéostasie tissulaire. La dérégulation de la signalisation et de l’expression de l’EGFR est largement étudiée dans la transformation oncogénique, l’invasion et les mécanismes de résistance aux thérapies ; l’EGFR contribue également à la réparation des plaies et à la signalisation inflammatoire dans divers contextes cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales EGFR (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EGFR dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EGFR (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EGFR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EGFR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EGFR ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.