Plasmide Double Nickase (m) EGFR: sc-420131-NIC

L’EGFR murin (Egfr) est une tyrosine kinase réceptrice qui se lie aux ligands de la famille du facteur de croissance épidermique (EGF), déclenchant la dimérisation du récepteur, l’autophosphorylation et la signalisation en aval. Une fois activé, l’EGFR mobilise les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT, JAK/STAT et PLCγ pour réguler la prolifération, la survie, la différenciation et l’homéostasie des tissus épithéliaux. Dans les modèles murins, la signalisation dépendante d’Egfr façonne les programmes du développement et les réponses aux lésions, et une activité EGFR altérée est fréquemment utilisée pour étudier la dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance en oncologie et en biologie de l’inflammation. L’EGFR interagit également avec le trafic endocytique et des régulateurs de rétrocontrôle qui ajustent l’amplitude et la durée du signal, ce qui soutient les études sur le renouvellement du récepteur et la dynamique de la transduction du signal.

EGFR Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Egfr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Egfr. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Egfr. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Egfr.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.