Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) EGFR: sc-400015-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EGFR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EGFR Double Nickase (h) et le plasmide EGFR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EGFR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EGFR Antibody (A-10): sc-373746
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EGFR | sc-400015-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EGFR | sc-400015-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR) est une tyrosine kinase membranaire qui régule la prolifération, la survie, la différenciation et la migration cellulaires grâce à une dimérisation induite par le ligand et à l'autophosphorylation. Une fois activé, l'EGFR transmet le signal via plusieurs voies majeures, notamment RAS–RAF–MEK–ERK (MAPK), PI3K–AKT–mTOR, PLCγ–PKC et JAK–STAT, en intégrant les signaux extracellulaires aux programmes transcriptionnels et métaboliques. En biologie humaine, une signalisation EGFR dérégulée par surexpression, amplification ou mutations activatrices est fréquemment associée à des phénotypes oncogéniques et à une sensibilité altérée aux stimuli des facteurs de croissance. L'EGFR participe également à l'homéostasie des tissus épithéliaux et à la réparation des plaies, ce qui en fait un nœud central pour l'étude de la dynamique de signalisation des récepteurs, du trafic intracellulaire et des interactions entre voies de signalisation.
EGFR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EGFR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EGFR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EGFR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EGFR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.