Plasmide CRISPR d'Activation (m) EGFL8: sc-429875-ACT

Egfl8 code EGFL8, une protéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire contenant des domaines de type EGF, qui soutient la communication cellule–cellule et cellule–matrice. Dans les tissus murins, l’expression d’EGFL8 a été associée à la régulation de la mise en place des patrons du développement, du comportement des cellules épithéliales et endothéliales, ainsi que des processus de remodelage extracellulaire qui influencent l’adhésion, la migration et l’organisation tissulaire. Par ces fonctions, EGFL8 est pertinente dans des contextes de signalisation qui coordonnent la morphogenèse et les interactions stroma–parenchyme, notamment via des voies en interface avec des programmes sensibles aux facteurs de croissance. Une activité ou une expression altérée d’EGFL8 est donc étudiée dans des modèles de remodelage tissulaire dérégulé et de biologie des maladies prolifératives, où des modifications du microenvironnement peuvent façonner le destin cellulaire et des phénotypes associés à l’invasion.

EGFL8 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Egfl8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EGFL8 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Egfl8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Egfl8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EGFL8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Egfl8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EGFL8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EGFL8 dans les cellules tumorales présentant une expression de Egfl8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.