Plasmide CRISPR d'Activation (m) EGFL7: sc-436135-ACT

Egfl7 code pour le domaine 7 de type facteur de croissance épidermique (EGFL7), une protéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire, enrichie dans les cellules endothéliales, qui soutient le développement vasculaire et le remodelage angiogénique. EGFL7 participe à la migration endothéliale, à la formation de structures tubulaires et à la stabilisation des vaisseaux, et a été associée à la modulation des signalisations cellule–cellule et cellule–matrice, notamment via des effets sur l’activité de la voie Notch lors de l’angiogenèse par bourgeonnement. Dans des modèles murins, une expression modifiée de Egfl7 perturbe l’organisation du réseau vasculaire et le comportement endothélial, impliquant ce gène dans des voies pertinentes pour les réponses aux lésions ischémiques et la néovascularisation associée aux tumeurs. Une dérégulation d’EGFL7 a également été étudiée dans des microenvironnements inflammatoires et lors du remodelage tissulaire, où la dysfonction endothéliale contribue aux phénotypes pathologiques.

EGFL7 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Egfl7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EGFL7 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Egfl7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Egfl7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EGFL7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Egfl7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EGFL7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EGFL7 dans les cellules tumorales présentant une expression de Egfl7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.