EGFL11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406815

概要

EYSは、光受容体細胞に豊富に存在する大型の細胞外マトリックス関連タンパク質であるEGFL11をコードしており、網膜外節の構造的完全性と維持に寄与します。EGFL11には複数のEGF様ドメインが含まれており、タンパク質間相互作用、細胞外足場形成、ならびに繊毛輸送と光受容（フォトトランスダクション）の恒常性を支える繊毛周囲環境の組織化に関わる役割と整合します。EYSの機能障害は、常染色体劣性網膜色素変性症をはじめ、進行性の光受容体機能障害を特徴とする関連表現型を含む遺伝性網膜変性と強く関連しています。そのため、EYS/EGFL11は、繊毛関連輸送、細胞外マトリックスの組織化、網膜細胞におけるストレス応答を制御する経路の研究で頻繁に扱われます。

EGFL11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEYS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EYS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EYSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EGFL11タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EGFL11シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EYS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EGFL11の機能に不可欠なEYSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EYSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EGFL11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEGFL11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EYS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EGFL11 HDRプラスミド（h）および EGFL11 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEYSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEYS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。