Plasmide CRISPR/Cas9 KO EGFL11 (h): sc-406815

Présentation

EYS code EGFL11, une grande protéine associée à la matrice extracellulaire, enrichie dans les cellules photoréceptrices où elle contribue à l’intégrité structurelle et au maintien du segment externe de la rétine. EGFL11 contient de multiples domaines de type EGF, compatibles avec des rôles dans les interactions protéine–protéine, l’échafaudage extracellulaire et l’organisation de l’environnement périciliaire qui soutient le trafic ciliaire et l’homéostasie de la phototransduction. L’altération de EYS est fortement liée aux dégénérescences rétiniennes héréditaires, notamment la rétinite pigmentaire autosomique récessive et des phénotypes apparentés caractérisés par une dysfonction progressive des photorécepteurs. Par conséquent, EYS/EGFL11 est fréquemment étudié dans les voies impliquées dans le transport associé au cil, l’organisation de la matrice extracellulaire et les réponses au stress dans les cellules rétiniennes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EGFL11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EYS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EYS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EYS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EGFL11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EYS pour l'étude de la signalisation de EGFL11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EYS essentiels à la fonction de EGFL11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EYS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EGFL11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EGFL11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EYS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EGFL11 plasmide HDR (h) et le EGFL11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EYS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EYS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.