Eg5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402276-LAC

Eg5, auch bekannt als Kinesin-Familienmitglied 11 (KIF11), ist ein mikrotubulusbasierendes Motorprotein, das für den Aufbau und die Aufrechterhaltung bipolarer mitotischer Spindeln während der Zellteilung essenziell ist. Durch die Erzeugung nach außen gerichteter Kräfte, die Centrosomen voneinander trennen und Spindel-Mikrotubuli organisieren, unterstützt Eg5 die Chromosomenausrichtung und die zuverlässige Trennung während der M‑Phase. Seine Aktivität ist in die Kontrolle durch den mitotischen Checkpoint sowie in Signalwege der Mikrotubulusdynamik eingebunden, wodurch die Eg5‑Funktion eng mit der Proliferationsfähigkeit und der Genomstabilität verknüpft ist. Eine fehlregulierte Spindelassemblierung und chromosomale Instabilität, die mit veränderter Eg5‑Funktion einhergehen, sind für die Krebszellbiologie und andere, durch Proliferation getriebene Krankheitsmodelle relevant.

Eg5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente -Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Eg5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Eg5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen -Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.