EFP Plasmide Double Nickase (m): sc-432163-NIC

Mouse Trim25 codifica EFP (TRIM25), una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING che regola la stabilità proteica e la segnalazione tramite modificazioni post-traduzionali dipendenti dall’ubiquitina. EFP partecipa alle vie dell’immunità innata e dell’infiammazione modulando la segnalazione dei recettori di riconoscimento del patogeno e le risposte stimolate dall’interferone, e influenza anche il metabolismo dell’RNA attraverso interazioni con proteine leganti l’RNA. Oltre alla difesa antivirale, TRIM25 è stata collegata alla regolazione del ciclo cellulare e delle risposte allo stress, rendendola rilevante per lo studio del controllo dipendente dal contesto dei programmi trascrizionali e della proteostasi. Alterazioni dell’attività di TRIM25 e delle reti di ubiquitinazione sono associate a disregolazione immunitaria e fenotipi correlati al cancro, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca incentrata sulle vie di segnalazione.

EFP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trim25 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trim25. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trim25. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trim25 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.