Plasmide CRISPR/Cas9 KO EF-2 (h): sc-401163

Présentation

Le gène humain **EEF2** code le facteur d’élongation 2 (EF-2), un composant essentiel du cycle d’élongation de la traduction qui assure la translocation du ribosome le long de l’ARNm et maintient la synthèse protéique globale. L’activité d’EF-2 est étroitement couplée aux signaux liés aux nutriments et au stress via la phosphorylation médiée par **EF2K**, et s’articule avec le contrôle translationnel régulé par **mTOR**, reliant ainsi la dynamique ribosomique à la croissance cellulaire et à l’adaptation métabolique. Une perturbation de **EEF2** influence la protéostasie, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress, et une régulation altérée d’EF-2 a été rapportée dans divers contextes impliquant une prolifération dérégulée et la neurobiologie. En tant que nœud central du contrôle de la traduction, **EEF2** est couramment étudié dans les voies gouvernant la fonction ribosomique, la signalisation intégrée du stress et la traduction sélective en conditions de stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EF-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EEF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EEF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EEF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EF-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EEF2 pour l'étude de la signalisation de EF-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EEF2 essentiels à la fonction de EF-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EEF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EF-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EF-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EEF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EF-2 plasmide HDR (h) et le EF-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EEF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EEF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.