Plasmide CRISPR d'Activation (h) EDG-6: sc-404415-ACT

S1PR4 (EDG-6) code un récepteur couplé aux protéines G de la sphingosine-1-phosphate (S1P), jouant des rôles majeurs dans les compartiments immunitaire et hématopoïétique. EDG-6 se couple à des nœuds de signalisation en aval, notamment PI3K–AKT, MAPK/ERK et les GTPases de la famille Rho, afin de réguler la chimiotaxie, le remodelage du cytosquelette, les programmes de cytokines et la survie cellulaire. Grâce au contrôle, dépendant de la S1P, de la migration des leucocytes et de la signalisation inflammatoire, S1PR4 est utilisé pour étudier l’homéostasie immunitaire, la biologie des cellules myéloïdes et les réponses transcriptionnelles induites par les récepteurs. Une activité dérégulée de l’axe S1P–S1PR a été associée à des mécanismes physiopathologiques inflammatoires et à des processus du microenvironnement tumoral, ce qui soutient des investigations mécanistiques de la modulation immunitaire et des réseaux de signalisation oncogéniques.

EDG-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S1PR4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EDG-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S1PR4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S1PR4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EDG-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S1PR4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EDG-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EDG-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de S1PR4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.