Plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-1/S1P1/S1PR1 (h): sc-400413

Présentation

S1PR1 (EDG-1/S1P1) code un récepteur couplé aux protéines G de la sphingosine-1-phosphate (S1P) qui convertit la signalisation lipidique extracellulaire en programmes intracellulaires contrôlant la migration cellulaire, la survie et la fonction de barrière. Par son couplage à Gi et à des effecteurs en aval tels que PI3K–AKT, MAPK/ERK et les petites GTPases de la famille Rho, S1PR1 régule la dynamique du cytosquelette, l’adhésion et la perméabilité endothéliale. Il constitue un nœud central de la biologie de la voie S1P, influençant le développement vasculaire et le trafic des cellules immunitaires, et son dérèglement est impliqué dans les dysfonctions vasculaires associées à l’inflammation ainsi que dans le remodelage du microenvironnement tumoral. En tant que récepteur membranaire dont les sorties de signalisation dépendent du contexte, S1PR1 est largement étudié dans des modèles d’angiogenèse, de sortie des leucocytes et d’homéostasie endothéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-1/S1P1/S1PR1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène S1PR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du S1PR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert S1PR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EDG-1/S1P1/S1PR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en S1PR1 pour l'étude de la signalisation de EDG-1/S1P1/S1PR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de S1PR1 essentiels à la fonction de EDG-1/S1P1/S1PR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de S1PR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EDG-1/S1P1/S1PR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EDG-1/S1P1/S1PR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus S1PR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EDG-1/S1P1/S1PR1 plasmide HDR (h) et le EDG-1/S1P1/S1PR1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie S1PR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles S1PR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.