Plasmide CRISPR d'Activation (h) Edc4: sc-403803-ACT

L’EDC4 humain code Edc4, une protéine d’échafaudage conservée des corps de traitement cytoplasmiques (P-bodies), qui coordonne le décapsidage de l’ARNm et sa dégradation dans le sens 5′→3′ en organisant des facteurs centraux tels que DCP1/DCP2 et des exonucléases associées. Par son rôle dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique, Edc4 influence le renouvellement des ARNm, la répression de la traduction et la dynamique des granules ribonucléoprotéiques répondant au stress. La perturbation des P-bodies et des voies de décapsidage peut remodeler les programmes de stabilité des transcrits qui façonnent la prolifération, la différenciation et la signalisation inflammatoire. Une dérégulation du métabolisme de l’ARN et de l’activité du complexe de décapsidage a été associée à des phénotypes oncogéniques et neurobiologiques, ce qui fait d’EDC4 un nœud pertinent pour l’étude de l’homéostasie de l’ARN liée aux maladies.

Edc4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EDC4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Edc4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EDC4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EDC4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Edc4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EDC4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Edc4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Edc4 dans les cellules tumorales présentant une expression de EDC4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.