Edc3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402917-ACT

Das humane Gen **EDC3** kodiert **Edc3**, einen evolutionär konservierten Verstärker der mRNA-Decapping-Reaktion, der den Decapping-Komplex **DCP1–DCP2** mit zusätzlichen Repressoren verknüpft und so den Abbau von Transkripten fördert. Edc3 wirkt in zytoplasmatischen **Processing Bodies (P-Bodies)** und beteiligt sich an der posttranskriptionellen Genregulation, indem es translationelle Repression mit dem **5′-zu-3′-mRNA-Abbau** koppelt. Dadurch prägt es die RNA-Grundkonzentration im Steady State sowie stressresponsive Expressionsprogramme. Über die Kontrolle der RNA-Stabilität beeinflusst **EDC3** Signalwege, die **Proteostase**, angeborene Stresssignalgebung und Zellzustandsübergänge steuern, welche von einer schnellen Umgestaltung des Transkriptoms abhängen. Eine Fehlregulation des mRNA-Abbaus und der P-Body-Dynamik ist breit mit Krebsbiologie und Neurodegeneration verknüpft, wodurch **EDC3** einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien des RNA-Stoffwechsels in krankheitsrelevanten Kontexten darstellt.

Edc3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EDC3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Edc3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EDC3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EDC3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Edc3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EDC3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Edc3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Edc3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EDC3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.