Plásmido Doble Nickase (h) ECM1: sc-404321-NIC

ECM1 (proteína 1 de la matriz extracelular) es una glicoproteína secretada, enriquecida en la matriz extracelular asociada a la membrana basal, e implicada en la organización de la arquitectura tisular mediante interacciones con componentes estructurales y de señalización de la MEC. Contribuye a la regulación de la adhesión célula–matriz, la remodelación de la matriz extracelular y las señales del microambiente que influyen en la homeostasis epitelial y en procesos angiogénicos. La alteración de la expresión de ECM1 se ha asociado con una señalización estromal desregulada y cambios patológicos en la piel, las mucosas y otros tejidos, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de redes de señalización extracelular. Como factor asociado a la matriz, ECM1 se examina con frecuencia en el contexto de una remodelación tipo fibrótica, cambios tisulares ligados a la inflamación y la biología del microambiente tumoral.

ECM1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ECM1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ECM1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ECM1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ECM1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.