Plásmido CRISPR de Activación (h) ECM1: sc-404321-ACT

ECM1 (proteína 1 de la matriz extracelular) es una glicoproteína secretada que contribuye a la organización de la matriz extracelular y a la integridad de la membrana basal al modular las interacciones entre los componentes de la matriz y los receptores de la superficie celular. Influye en la adhesión y migración celular, así como en procesos de remodelación tisular relevantes para la homeostasis epitelial y vascular, y se asocia con vías que regulan el recambio de la matriz y los microambientes inflamatorios. La alteración de la expresión o la función de ECM1 se ha vinculado con trastornos de la piel y del tejido conectivo y se ha descrito en contextos de dinámica tumor–estroma, lo que la convierte en una diana útil para estudiar la señalización regulada por la matriz extracelular y el control microambiental del comportamiento celular.

ECM1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ECM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ECM1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ECM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ECM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ECM1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ECM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ECM1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ECM1 en células tumorales con expresión de ECM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.