Plasmide CRISPR/Cas9 KO EBF4 (h): sc-402438

Présentation

EBF4 (early B-cell factor 4) est un facteur de transcription à domaine hélice–boucle–hélice de la famille EBF, qui se lie à l’ADN pour réguler des programmes d’expression génique associés à la spécification du destin cellulaire et à la différenciation tissulaire. En coordonnant des réseaux transcriptionnels qui s’articulent avec la régulation de la chromatine et les voies de signalisation du développement, EBF4 peut influencer des processus liés aux lignages, tels que l’expression de gènes neuronaux et immunitaires. Une régulation altérée des circuits transcriptionnels de la famille EBF a été étudiée dans des contextes incluant des phénotypes neurodéveloppementaux et la reprogrammation transcriptionnelle associée au cancer, faisant d’EBF4 un nœud pertinent pour l’étude des dérégulations de la différenciation. L’étude fonctionnelle d’EBF4 permet une analyse mécanistique des cibles en aval, de l’occupation des promoteurs/activateurs (enhancers) et des effets à l’échelle des voies sur la prolifération et l’identité cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EBF4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EBF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EBF4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EBF4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EBF4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EBF4 pour l'étude de la signalisation de EBF4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EBF4 essentiels à la fonction de EBF4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EBF4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EBF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EBF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EBF4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EBF4 plasmide HDR (h) et le EBF4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EBF4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EBF4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.