Plasmide CRISPR d'Activation (h) EBF2: sc-402456-ACT

EBF2 (early B-cell factor 2) est un facteur de transcription de type hélice–boucle–hélice qui se lie à des motifs spécifiques de l’ADN afin de réguler la spécification des lignages et les programmes de différenciation au cours du développement humain. Il joue des rôles majeurs dans la biologie des adipocytes, la différenciation neuronale et les voies ostéogéniques en coordonnant des réseaux transcriptionnels qui contrôlent l’expression de gènes métaboliques et les décisions de destinée cellulaire. L’activité d’EBF2 s’intègre aux processus de remodelage de la chromatine et de sélection des enhancers pour maintenir des états transcriptionnels stables, et sa dérégulation a été associée à une altération des programmes thermogéniques du tissu adipeux, à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une reprogrammation transcriptionnelle liée au cancer. En tant que régulateur nodal de l’expression génique spécifique des tissus, EBF2 est fréquemment étudié dans le cadre du contrôle épigénétique, de l’homéostasie métabolique et des cascades de signalisation associées à la différenciation.

EBF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EBF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EBF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EBF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EBF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EBF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EBF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EBF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EBF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de EBF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.