Plásmido Doble Nickase (h) EB1: sc-401367-NIC

MAPRE1 codifica la proteína 1 de unión al extremo (EB1), una proteína central de seguimiento del extremo plus de los microtúbulos que reconoce el capuchón de tubulina-GTP y coordina el crecimiento y la estabilización de los microtúbulos. EB1 actúa como andamiaje para redes de +TIP, conectando microtúbulos dinámicos con los cinetocoros y la corteza celular para favorecer el ensamblaje del huso, la segregación cromosómica y la migración celular dirigida. Mediante interacciones con APC, proteínas CLIP y reguladores de dineína/dinactina, EB1 integra la dinámica de los microtúbulos con la progresión mitótica y las vías de polaridad celular. La desregulación de la función y la expresión de MAPRE1/EB1 se ha asociado con alteraciones de la estabilidad cromosómica y con el remodelado del citoesqueleto observados en estudios de biología celular relacionados con el cáncer.

EB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAPRE1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAPRE1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAPRE1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAPRE1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.