Particules Lentivirales d'Activation (m) EAR2: sc-420216-LAC

Nr2f6 code EAR2 (NR2F6), un récepteur nucléaire orphelin qui agit comme régulateur transcriptionnel se liant à l’ADN et coordonne des programmes de lignée ainsi qu’une expression génique dépendante des stimuli. Dans les cellules de souris, EAR2 s’intègre aux réseaux des récepteurs nucléaires pour moduler la transcription au niveau des éléments de réponse hormonale et de motifs cis-régulateurs apparentés, influençant la signalisation immunitaire, les programmes géniques inflammatoires et les états de différenciation cellulaire. À travers ces rôles, NR2F6/EAR2 a été étudié dans des contextes incluant la polarisation fonctionnelle des lymphocytes T, les réponses immunitaires innées et les interactions tumeur–système immunitaire, où un contrôle transcriptionnel altéré peut modifier les voies des cytokines et la fitness cellulaire. En tant que régulateur de l’homéostasie transcriptionnelle, EAR2 est pertinent pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire, du contrôle épigénétique et des réseaux géniques sensibles au stress.

Les particules d'activation lentivirales EAR2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Nr2f6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EAR2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Nr2f6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EAR2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Nr2f6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.