Plasmide CRISPR d'Activation (m) EAF1: sc-428881-ACT

Le gène murin *Eaf1* code EAF1, un cofacteur transcriptionnel nucléaire initialement caractérisé comme un facteur associé à ELL, qui contribue à coordonner l’élongation de l’ARN polymérase II et les programmes d’expression génique. EAF1 participe à des complexes régulateurs associés à la chromatine et a été impliqué dans le contrôle de la progression du cycle cellulaire, de la différenciation et des réponses transcriptionnelles au stress. Par son rôle dans la régulation transcriptionnelle, EAF1 peut influencer des voies qui gouvernent la prolifération et les réseaux de gènes du développement, ce qui le rend pertinent pour l’étude de la transcription dérégulée en biologie du cancer et dans d’autres contextes où le contrôle de l’expression des gènes est perturbé. L’étude de la fonction d’*Eaf1* aide à disséquer les mécanismes de l’élongation transcriptionnelle et des événements régulateurs proximaux au promoteur dans les cellules de mammifères.

EAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Eaf1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Eaf1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Eaf1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EAF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Eaf1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EAF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EAF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Eaf1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.