EAAT4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422986

Descripción general

Slc1a6 codifica el transportador de aminoácidos excitatorios 4 (EAAT4), un transportador de glutamato de alta afinidad dependiente de Na+ que contribuye a la eliminación del glutamato extracelular y limita la señalización excitotóxica en las sinapsis. En el SNC del ratón, EAAT4 se encuentra enriquecido en las neuronas de Purkinje del cerebelo y modula la transmisión sináptica al acoplar la captación de glutamato a los gradientes iónicos, influyendo así en la excitabilidad neuronal y la plasticidad. Mediante la regulación de la neurotransmisión glutamatérgica, EAAT4 se integra con vías vinculadas a la homeostasis sináptica, la señalización dependiente de calcio y las respuestas neuroinflamatorias ante el glutamato desregulado. La alteración de la capacidad de transporte de glutamato es relevante en modelos de disfunción cerebelosa y en fenotipos más amplios asociados a la neurodegeneración, donde se ven comprometidas la señalización excitatoria y la integridad sináptica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EAAT4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc1a6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc1a6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc1a6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EAAT4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc1a6 para la investigación de la señalización de EAAT4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc1a6 críticos para la función de EAAT4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc1a6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EAAT4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido EAAT4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc1a6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EAAT4 (m) y el plásmido HDR EAAT4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc1a6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc1a6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.