Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT2 (m): sc-422984
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- EAAT2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique EAAT2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EAAT2 Antibody (E-1): sc-365634
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT2 (m) | sc-422984 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Slc1a2 code pour le transporteur d’acides aminés excitateurs 2 (EAAT2), un transporteur du glutamate à haute capacité dépendant du Na+, exprimé principalement dans les astrocytes, qui élimine le glutamate synaptique afin de maintenir la neurotransmission excitatrice et de prévenir le stress excitotoxique. EAAT2 module la signalisation glutamatergique en couplant la recapture du glutamate aux gradients ioniques et en soutenant le couplage métabolique astrocyte–neurone via le cycle glutamate–glutamine. En régulant l’homéostasie du glutamate extracellulaire, Slc1a2 influence la plasticité synaptique, la survie neuronale et l’excitabilité des réseaux. Une altération de la fonction ou de l’expression d’EAAT2 a été associée à des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence, l’épilepsie et la neuroinflammation, faisant de Slc1a2 une cible fréquente dans les études de voies du système nerveux central.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc1a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc1a2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc1a2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EAAT2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc1a2 pour l'étude de la signalisation de EAAT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Slc1a2 essentiels à la fonction de EAAT2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc1a2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le EAAT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EAAT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc1a2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le EAAT2 plasmide HDR (m) et le EAAT2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc1a2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc1a2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.