EAAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400917

Übersicht

SLC1A3 kodiert den exzitatorischen Aminosäuretransporter 1 (EAAT1), einen hochaffinen, natriumabhängigen Glutamat-/Aspartat-Transporter, der in Astrozyten angereichert ist und die Entfernung von extrazellulärem Glutamat unterstützt. Durch die Kopplung der Glutamataufnahme an ionische Gradienten trägt EAAT1 zur Aufrechterhaltung der synaptischen Transmission bei, reguliert die metabolische Kopplung zwischen Neuronen und Glia und begrenzt exzitotoxische Signalwege; zugleich unterstützt er das Redox-Gleichgewicht, indem er über die Verfügbarkeit von Glutamat die Glutathionsynthese mitermöglicht. Die EAAT1-Aktivität ist in die glutamaterge Neurotransmission, astrozytäre Homöostaseprogramme sowie Signalwege eingebunden, die die Pufferung extrazellulärer Ionen und das Recycling von Neurotransmittern steuern. Eine veränderte Funktion oder Expression von SLC1A3 wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter episodische Ataxie und eine erhöhte Anfälligkeit für exzitotoxische Schäden, was das Gen für Studien zur Stabilität von ZNS-Schaltkreisen und zur Glia-Biologie relevant macht.

Das EAAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC1A3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC1A3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC1A3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EAAT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC1A3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EAAT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC1A3-Exone abzielen, die für die EAAT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC1A3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EAAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EAAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC1A3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EAAT1 HDR-Plasmid (h) und EAAT1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC1A3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC1A3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.