Plasmide CRISPR/Cas9 KO E4BP4 (m): sc-421874
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- E4BP4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique E4BP4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: E4BP4 Antibody (C-6): sc-374451
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO E4BP4 (m) | sc-421874 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Nfil3 code le facteur de transcription à fermeture éclair basique à leucines E4BP4 (NFIL3), un régulateur de programmes d’expression génique qui intègrent les signaux circadiens aux voies de signalisation immunitaires et métaboliques. Chez la souris, E4BP4 oriente la différenciation et les fonctions effectrices des cellules immunitaires innées et adaptatives, notamment le développement des cellules NK (natural killer) et des réseaux transcriptionnels dépendants des cytokines. Il participe à des voies liées à JAK/STAT et à la signalisation inflammatoire, et module la survie cellulaire ainsi que les réponses transcriptionnelles au stress. La dérégulation des programmes associés à NFIL3 est pertinente dans l’étude des déséquilibres immunitaires, de l’inflammation et de l’immunologie tumorale, où un contrôle transcriptionnel altéré peut influencer l’homéostasie tissulaire et les phénotypes pathologiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO E4BP4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nfil3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nfil3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nfil3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine E4BP4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nfil3 pour l'étude de la signalisation de E4BP4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Nfil3 essentiels à la fonction de E4BP4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nfil3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le E4BP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le E4BP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nfil3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le E4BP4 plasmide HDR (m) et le E4BP4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nfil3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nfil3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.