E4BP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401353

Übersicht

NFIL3 kodiert den basischen Leucin-Zipper-Transkriptionsfaktor E4BP4, einen kontextabhängigen Regulator der Genexpression, der zirkadiane Signale mit Immun- und Stoffwechselprogrammen integriert. E4BP4 beeinflusst Differenzierung und Effektorfunktion in lymphoiden Zelllinien und umfasst dabei die Regulation von Zytokinnetzwerken und Überlebenssignalwegen; zudem trägt es zur homöostatischen Kontrolle entzündlicher Signalübertragung bei. Darüber hinaus ist E4BP4 in transkriptionelle Schaltkreise eingebunden, die zelluläre Stressantworten und das Entwicklungs-Timing prägen, und verknüpft so rhythmische Regulation mit umfassenderen genregulatorischen Netzwerken. Eine fehlregulierte NFIL3/E4BP4-Aktivität wurde in Forschungszusammenhängen mit immunvermittelter Pathologie, hämatologischen Phänotypen sowie veränderten metabolischen und zirkadianen Phänotypen in Verbindung gebracht.

Das E4BP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NFIL3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NFIL3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NFIL3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die E4BP4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NFIL3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der E4BP4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NFIL3-Exone abzielen, die für die E4BP4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NFIL3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom E4BP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom E4BP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NFIL3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das E4BP4 HDR-Plasmid (h) und E4BP4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NFIL3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NFIL3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.