Plasmide CRISPR d'Activation (h) E2F1: sc-400123-ACT

E2F1 (facteur de transcription E2F 1) est un facteur de transcription à spécificité de séquence qui contrôle la transition G1/S en coordonnant l’expression des gènes nécessaires à la réplication de l’ADN, au métabolisme des nucléotides et à la progression du cycle cellulaire. Son activité est étroitement régulée par l’axe RB/E2F, qui intègre les signaux mitogènes au contrôle des points de contrôle, et elle s’articule également avec l’apoptose dépendante de p53 et les réponses aux dommages de l’ADN. Une dérégulation de la signalisation d’E2F1 est fréquemment associée à une prolifération incontrôlée, au stress de réplication et à l’instabilité génomique observés dans de nombreux cancers et autres troubles prolifératifs. Comme E2F1 peut aussi influencer l’apoptose, la sénescence et les programmes de différenciation, il est largement utilisé pour étudier des décisions de destinée cellulaire dépendantes du contexte.

E2F1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de E2F1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

E2F1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus E2F1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription E2F1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de E2F1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus E2F1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de E2F1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie E2F1 dans les cellules tumorales présentant une expression de E2F1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.