Plasmide CRISPR/Cas9 KO E2F-8 (h): sc-406972

Présentation

E2F8 code E2F-8, un membre atypique de la famille des facteurs de transcription E2F, qui fonctionne principalement comme répresseur transcriptionnel en contrôlant la progression du cycle cellulaire et le calendrier de la réplication de l’ADN. E2F-8 participe aux réseaux régulés par RB/E2F, coordonne l’expression des gènes de la phase S et contribue au maintien de la stabilité du génome via la régulation des programmes prolifératifs. Il joue un rôle dans le contrôle de la croissance au cours du développement et dans les décisions de destin cellulaire, et une expression altérée d’E2F8 a été associée à une prolifération dérégulée observée dans de multiples contextes cancéreux. Comme E2F-8 s’interface avec des voies centrales liées aux points de contrôle et à la réplication, il constitue un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel de l’entrée en cycle cellulaire et les réponses au stress de réplication.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO E2F-8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène E2F8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du E2F8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert E2F8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine E2F-8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en E2F8 pour l'étude de la signalisation de E2F-8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de E2F8 essentiels à la fonction de E2F-8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de E2F8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le E2F-8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le E2F-8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus E2F8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le E2F-8 plasmide HDR (h) et le E2F-8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie E2F8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles E2F8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.