Plasmide CRISPR d'Activation (h) E2F-7: sc-401855-ACT

E2F7 code E2F-7, un répresseur transcriptionnel atypique de la famille E2F qui contribue à assurer la synchronisation du cycle cellulaire en limitant l’expression des gènes répondant à E2F pendant la phase S et en participant au contrôle des points de contrôle (checkpoints). En modulant des programmes transcriptionnels liés à la réplication de l’ADN, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la prolifération cellulaire, E2F-7 influence la stabilité du génome et l’adaptation au stress. Une dérégulation de l’expression d’E2F7 a été associée à des phénotypes prolifératifs et à des états de différenciation altérés, ce qui en fait un élément pertinent pour l’étude de la signalisation oncogénique, du stress réplicatif et de la régulation du destin cellulaire. E2F-7 s’inscrit également dans la dynamique plus large du réseau Rb/E2F, qui coordonne la progression à travers la transition G1/S et les phases ultérieures du cycle cellulaire.

E2F-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de E2F7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

E2F-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus E2F7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription E2F7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de E2F-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus E2F7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de E2F-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie E2F-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de E2F7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.