Plasmide CRISPR d'Activation (h) E2F-6: sc-403615-ACT

E2F6 code pour E2F-6, un régulateur transcriptionnel atypique de la famille E2F qui agit principalement comme répresseur transcriptionnel indépendamment de la liaison à RB. Il contribue au contrôle du cycle cellulaire et à la différenciation en réprimant des gènes sensibles à E2F impliqués dans la réplication de l’ADN et l’entrée en phase S, et participe à la répression associée à la chromatine via le recrutement de complexes du groupe Polycomb. Par ces mécanismes, E2F-6 aide à maintenir des programmes transcriptionnels appropriés au cours du développement et lors des transitions d’état cellulaire. Une activité d’E2F6 dérégulée a été associée à des altérations de la prolifération et du contrôle épigénétique en cancérologie, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réseaux transcriptionnels oncogéniques et de la plasticité de lignée.

E2F-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de E2F6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

E2F-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus E2F6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription E2F6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de E2F-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus E2F6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de E2F-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie E2F-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de E2F6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.