Plasmide Double Nickase (m) E2F-4: sc-430537-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) E2F-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide E2F-4 Double Nickase (m) et le plasmide E2F-4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant E2f4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: E2F-4 Antibody (D-7): sc-398543
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) E2F-4 | sc-430537-NIC | 20 µg | $410.00 |
E2F-4 (E2f4) est un facteur de transcription de la famille E2F qui régule la progression du cycle cellulaire et les décisions de destinée cellulaire en contrôlant l’expression de gènes requis pour la transition G1/S et la réplication de l’ADN. Dans les cellules de souris, E2F-4 fonctionne couramment avec des partenaires DP et s’associe à des protéines de la famille « pocket » telles que p107 et p130 afin d’imposer une répression transcriptionnelle durant la quiescence et la différenciation. Par l’intermédiaire de ces complexes, E2F-4 contribue au contrôle de la prolifération, à l’intégrité des points de contrôle et à la régulation de l’expression génique liée à la chromatine au sein du réseau RB/E2F. La dérégulation de la signalisation de la voie E2F est largement impliquée dans la prolifération oncogénique et les états de différenciation altérés, faisant d’E2f4 une cible utile pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans des modèles de développement.
E2F-4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus E2f4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de E2f4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de E2f4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de E2f4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.