E2F-4 Double Nickase Plasmid (m): sc-430537-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das E2F-4 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- E2F-4 Double-Nickase-Plasmid (m) und E2F-4 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf E2f4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: E2F-4: sc-398543
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
E2F-4 Double Nickase Plasmid (m) | sc-430537-NIC | 20 µg | $410.00 |
E2F-4 (E2f4) ist ein Transkriptionsfaktor der E2F-Familie, der den Zellzyklusverlauf und Entscheidungen über das Zellschicksal reguliert, indem er die Expression von Genen steuert, die für den G1/S-Übergang und die DNA-Replikation erforderlich sind. In Mauszellen wirkt E2F-4 häufig mit DP-Partnern zusammen und assoziiert mit Pocket-Proteinen wie p107 und p130, um während Quieszenz und Differenzierung eine transkriptionelle Repression aufrechtzuerhalten. Über diese Komplexe trägt E2F-4 zur Kontrolle von Proliferation, Checkpoint-Integrität und der chromatinvermittelten Regulation der Genexpression durch das RB/E2F-Netzwerk bei. Eine Fehlregulation der E2F-Signalübertragung ist breit relevant für onkogene Proliferation und veränderte Differenzierungszustände, wodurch E2f4 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und in Entwicklungsmodellen darstellt.
E2F-4 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des E2f4-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von E2f4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die E2f4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit E2f4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.