Plasmide CRISPR/Cas9 KO E2A (m): sc-423303
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- E2A Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique E2A, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: E2A Antibody (Yae): sc-416
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO E2A (m) | sc-423303 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Tcf3 code le facteur de transcription E2A à domaine basique hélice–boucle–hélice (bHLH), un régulateur clé de l’engagement de lignée et des programmes de différenciation, en particulier dans les compartiments hématopoïétique et lymphoïde. E2A forme des dimères qui se lient aux motifs E-box pour contrôler des réseaux géniques impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et la temporalité du développement, et il interagit fonctionnellement avec les voies de signalisation Notch, Wnt/β-caténine et TGF-β. Dans des modèles murins, une activité altérée de Tcf3 perturbe le développement des lymphocytes B et T et peut remodeler des états transcriptionnels influençant le maintien des cellules souches/progénitrices. La dérégulation des circuits transcriptionnels dépendants d’E2A est fréquemment étudiée dans le contexte des réseaux de facteurs de transcription oncogéniques et des défauts de maturation des cellules immunitaires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO E2A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tcf3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tcf3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tcf3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine E2A.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tcf3 pour l'étude de la signalisation de E2A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tcf3 essentiels à la fonction de E2A
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tcf3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le E2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le E2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tcf3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le E2A plasmide HDR (m) et le E2A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tcf3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tcf3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.