Plasmide CRISPR d'Activation (m) E-cadherin: sc-419587-ACT

Cdh1 code l’E‑cadherine, un récepteur d’adhésion cellule–cellule dépendant du Ca2+ qui organise les jonctions d’adhérence via des interactions homophiles et son ancrage au cytosquelette d’actine par l’intermédiaire des caténines. Ce complexe est au cœur de la polarité épithéliale, de l’architecture tissulaire et de l’inhibition de contact, et il module des réseaux de signalisation, notamment Wnt/β‑caténine, Hippo/YAP‑TAZ et les voies des récepteurs aux facteurs de croissance, qui coordonnent différenciation et prolifération. Dans des modèles murins, une expression altérée de l’E‑cadherine perturbe l’intégrité de la barrière épithéliale et la morphogenèse, et elle est largement utilisée comme lecture moléculaire de la plasticité épithélio‑mésenchymateuse dans les études de l’invasion et de la compétence métastatique. Un dérèglement de la fonction de CDH1/E‑cadherine est fréquemment associé à la progression tumorale, à des dysfonctions inflammatoires de la barrière et à des anomalies du développement, ce qui souligne son importance pour la recherche mécanistique sur les maladies.

E-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cdh1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

E-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cdh1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cdh1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de E-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cdh1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de E-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie E-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de Cdh1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.