Plasmide Double Nickase (h) Dynein IC1, cytosolic: sc-405213-NIC

DYNC1I1 code la chaîne intermédiaire 1 de la dynéine 1 cytosolique, une sous-unité centrale du complexe moteur dynéine–dynactine, qui assure le transport dirigé vers l’extrémité moins le long des microtubules. La dynéine IC1 contribue à la reconnaissance des cargos et à la régulation du moteur, soutenant le positionnement des endosomes et des lysosomes, l’organisation de l’appareil de Golgi, la dynamique du fuseau mitotique et le transport axonal rétrograde dans les neurones. Par ces processus, DYNC1I1 aide à coordonner le trafic intracellulaire, la division cellulaire et la signalisation spatiale émanant des organites. La dérégulation des composants du complexe dynéine est fréquemment étudiée dans le contexte de mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que de l’instabilité chromosomique et d’altérations des voies de protéostasie.

Dynein IC1, cytosolic Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DYNC1I1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DYNC1I1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DYNC1I1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DYNC1I1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.