Dynein HC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400919
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Dynein HC Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Dynein HC-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dynein HC: sc-514579
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dynein HC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-400919 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
DYNC1H1 kodiert die schwere Kette des zytoplasmatischen Dynein-1, eines mikrotubulusbasierten Motorproteins, das die Hydrolyse von ATP in einen zum Minus-Ende gerichteten Transport umsetzt. Die Dynein-Schwerkette ist zentral für den intrazellulären Transport, die Positionierung von Organellen, die Dynamik von Endosomen und Lysosomen, den axonalen Transport sowie den Aufbau und die Ausrichtung der mitotischen Spindel durch koordinierte Aktivität mit Dynactin und Adapterproteinen. Indem DYNC1H1 mikrotubulusabhängige Transport- und Zellteilungsprozesse mitprägt, beeinflusst es die Erhaltung von Neuronen, ihre Polarität und Proteostase‑Signalwege. Genetische Störungen oder Funktionsdefekte der Dynein-Schwerkette wurden mit Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neuromuskulärer Erkrankungen in Verbindung gebracht, wodurch sie ein wichtiges Ziel für die Untersuchung von Transportdefekten und zytoskelettalen Stressantworten darstellt.
Das Dynein HC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DYNC1H1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DYNC1H1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DYNC1H1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dynein HC-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DYNC1H1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dynein HC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf DYNC1H1-Exone abzielen, die für die Dynein HC-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere DYNC1H1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Dynein HC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Dynein HC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DYNC1H1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dynein HC HDR-Plasmid (h) und Dynein HC HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DYNC1H1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DYNC1H1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.