Plasmide Double Nickase (m) Dynactin p62: sc-426674-NIC

Le gène murin Dctn4 code la dynactine p62, une sous-unité du complexe dynactine qui soutient le transport cytoplasmique assuré par la dynéine le long des microtubules. La dynactine p62 contribue à la liaison des cargos et à la motilité processive des assemblages dynéine–dynactine, influençant le positionnement des endosomes et des lysosomes, le trafic vésiculaire et la prise en charge de cargos associés à l’autophagie. Par ces fonctions, Dctn4 participe à l’homéostasie des neurones et des cellules immunitaires, où le transport à longue distance et la distribution des organites sont essentiels. La perturbation des composants de la voie dynéine–dynactine est largement associée à des phénotypes neurodégénératifs, à une altération de la protéostasie et à des signaux inflammatoires, faisant de Dctn4 un nœud utile pour des études mécanistiques des défauts de transport dépendant des microtubules.

Dynactin p62 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dctn4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dctn4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dctn4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dctn4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.