Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynactin 1 (h): sc-402369
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Dynactin 1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Dynactin 1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Dynactin 1 Antibody (A-2): sc-365274
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynactin 1 (h) | sc-402369 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
DCTN1 code la dynactine 1, la principale sous-unité p150Glued du complexe dynactine, qui couple la dynéine cytoplasmique à ses cargaisons et aux microtubules afin d’assurer un transport processif dirigé vers l’extrémité « minus ». La dynactine 1 contribue au trafic des vésicules et des organites, au positionnement endosome–lysosome, à l’organisation de l’appareil de Golgi, au fonctionnement du fuseau mitotique et au transport axonal neuronal via la régulation du moteur dynéine–dynactine. En coordonnant le transport et la dynamique du cytosquelette, DCTN1 influence des voies impliquées dans la protéostasie, le flux autophagique et la gestion des granules de stress dans des cellules à longue durée de vie telles que les neurones. Des altérations génétiques ou un dysfonctionnement de DCTN1 ont été associés à des phénotypes neurodégénératifs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des défauts de transport dépendant des moteurs et de la vulnérabilité neuronale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynactin 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DCTN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DCTN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DCTN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dynactin 1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DCTN1 pour l'étude de la signalisation de Dynactin 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DCTN1 essentiels à la fonction de Dynactin 1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DCTN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Dynactin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dynactin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DCTN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Dynactin 1 plasmide HDR (h) et le Dynactin 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DCTN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DCTN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.