Plasmide Double Nickase (h) Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2: sc-400571-NIC

DVL2 code pour Dishevelled 2 (Dvl-2), une phosphoprotéine cytoplasmique qui agit comme transducteur central du signal pour les récepteurs Frizzled dans les voies Wnt. Grâce à des interactions protéine–protéine régulées, Dvl-2 coordonne la signalisation Wnt/β-caténine canonique ainsi que les voies non canoniques de polarité planaire cellulaire et Wnt/Ca²⁺, influençant la détermination du destin cellulaire, la polarité, la motilité et l’organisation du cytosquelette. Une activité aberrante de DVL2 ou un remaniement des voies est associée à une signalisation Wnt dérégulée observée dans divers cancers et phénotypes du développement, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer la diaphonie entre voies et les sorties de signalisation dépendantes du contexte. DVL2 interagit également avec le trafic endocytaire et la dynamique des échafaudages de signalisation, ce qui soutient des études mécanistiques des événements proximaux au récepteur et des programmes transcriptionnels en aval.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DVL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DVL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DVL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DVL2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.