Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 (m): sc-420081

Présentation

Le gène murin **Dvl2** code **Dishevelled 2 (DVL2)**, une protéine d’échafaudage cytoplasmique qui relaie les signaux des récepteurs **Frizzled** vers les voies **Wnt** en aval. DVL2 intègre la signalisation Wnt canonique **Wnt/β‑caténine** aux cascades non canoniques de **polarité planaire des cellules (PCP)** et **Wnt/Ca²⁺**, en coordonnant les complexes proximaux aux récepteurs et en régulant la dynamique du cytosquelette, la polarité et le trafic intracellulaire. Par ces fonctions, DVL2 contribue au patronnage embryonnaire, au comportement des cellules souches/progénitrices et à l’homéostasie tissulaire, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans des contextes de signalisation Wnt aberrante associée à des anomalies du développement et à des programmes de signalisation oncogéniques. **Dvl2** est également étudié pour ses effets sur la migration cellulaire et la morphogenèse, où l’équilibre entre la transcription dépendante de la β‑caténine et les sorties de la voie PCP est déterminant.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dvl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dvl2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dvl2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dvl2 pour l'étude de la signalisation de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dvl2 essentiels à la fonction de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dvl2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dvl2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 plasmide HDR (m) et le Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dvl2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dvl2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.