Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2: sc-400571-ACT

DVL2 code pour Dishevelled 2 (Dvl-2), une protéine échafaudage cytoplasmique qui couple les récepteurs Frizzled à la signalisation Wnt en aval. Dvl-2 coordonne à la fois les programmes transcriptionnels canoniques dépendants de la β-caténine et les voies non canoniques de polarité planaire (PCP) et Wnt/Ca²⁺, en intégrant les signaux via ses domaines DIX, PDZ et DEP. Par ces réseaux, DVL2 influence l’organisation embryonnaire, la polarité cellulaire, la migration et le remodelage du cytosquelette. Une activité aberrante de DVL2 et la dérégulation de la voie Wnt sont fréquemment étudiées dans des modèles de signalisation oncogénique, de troubles du développement et d’homéostasie tissulaire.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DVL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DVL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DVL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DVL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DVL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.