Plasmide Double Nickase (m) Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1: sc-420080-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Double Nickase (m) et le plasmide Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dvl1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Antibody (3F12): sc-8025
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 | sc-420080-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Dvl1** code Dvl-1 (Dishevelled 1), une protéine d’échafaudage cytoplasmique centrale qui transmet les signaux Wnt depuis les récepteurs Frizzled/LRP vers des réponses en aval. DVL1 coordonne la signalisation Wnt canonique dépendante de la β-caténine ainsi que les voies non canoniques de polarité planaire cellulaire et Wnt/Ca²⁺, en assemblant des complexes multiprotéiques qui régulent les événements proximaux au récepteur et la formation du « signalosome ». Par ces réseaux, DVL1 influence la polarité cellulaire, la migration, l’organisation du cytosquelette et l’établissement des patrons de développement. Une dérégulation de la signalisation Wnt–Dishevelled est largement pertinente pour l’étude de la signalisation oncogénique, des phénotypes neurodéveloppementaux et de l’homéostasie tissulaire dans des modèles murins.
Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dvl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dvl1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dvl1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dvl1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.