Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 (h): sc-400785

Présentation

DVL1 code Dishevelled 1 (Dvl-1), une phosphoprotéine cytoplasmique qui sert d’échafaudage central dans la transduction du signal Wnt. Dvl-1 intègre des signaux proximaux aux récepteurs provenant de Frizzled et de co-récepteurs afin de relayer à la fois la signalisation dépendante de la β-caténine (canonique) et la signalisation de polarité planaire/Wnt–Ca²⁺ (non canonique), influençant la polarité cellulaire, la migration et les programmes transcriptionnels. Grâce à ses domaines DIX, PDZ et DEP, Dvl-1 coordonne des complexes multiprotéiques qui régulent la stabilisation de la β-caténine, la signalisation via de petites GTPases et le remodelage du cytosquelette. La dérégulation de la signalisation Wnt/Dishevelled est fréquemment associée à des altérations de l’organisation du développement et à l’activation de voies oncogéniques, ce qui fait de DVL1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur le recâblage des voies de signalisation dans des contextes pathologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DVL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DVL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DVL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DVL1 pour l'étude de la signalisation de Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DVL1 essentiels à la fonction de Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DVL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DVL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 plasmide HDR (h) et le Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DVL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DVL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.