Plasmide CRISPR/Cas9 KO DUSP18 (h): sc-405897

Présentation

La phosphatase à double spécificité 18 (DUSP18) est un membre de la famille des DUSP atypiques, qui déphosphoryle des résidus phosphosérine/phosphothréonine et phosphotyrosine afin de moduler la signalisation pilotée par les kinases. Elle a été associée à la régulation de l’intensité de la voie MAPK ainsi qu’à des processus plus larges de réponse au stress cellulaire, qui influencent la prolifération, la survie et la fonction mitochondriale. En façonnant des réseaux de signalisation dépendants de la phosphorylation, DUSP18 peut affecter, de manière contextuelle, des programmes transcriptionnels et l’homéostasie métabolique. Une activité phosphatase altérée au sein de cette classe de régulateurs est pertinente pour des maladies caractérisées par une signalisation déréglée, notamment le cancer et des phénotypes inflammatoires ou métaboliques, ce qui fait de DUSP18 un nœud utile pour l’interrogation des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DUSP18 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DUSP18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DUSP18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DUSP18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DUSP18.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DUSP18 pour l'étude de la signalisation de DUSP18, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DUSP18 essentiels à la fonction de DUSP18
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DUSP18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DUSP18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DUSP18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DUSP18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DUSP18 plasmide HDR (h) et le DUSP18 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DUSP18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DUSP18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.