Plasmide Double Nickase (h) DTYMK: sc-405508-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DTYMK correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DTYMK Double Nickase (h) et le plasmide DTYMK Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DTYMK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DTYMK Antibody (B-8): sc-365925
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DTYMK | sc-405508-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DTYMK | sc-405508-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DTYMK code la désoxythymidylate kinase, une enzyme cytosolique qui phosphoryle le dTMP en dTDP, fournissant ainsi le dTTP nécessaire à la réplication et à la réparation de l’ADN. En contribuant au maintien de pools équilibrés de désoxynucléotides, DTYMK participe à la progression de la phase S, à la stabilité du génome et aux réponses cellulaires au stress réplicatif. Les perturbations du métabolisme du thymidylate et des voies de sauvetage des nucléotides peuvent influencer la signalisation des dommages à l’ADN et la charge mutationnelle, faisant de DTYMK un nœud utile pour étudier l’homéostasie des nucléotides dans des cellules prolifératives ou soumises à un stress. Des altérations de l’expression ou de l’activité de DTYMK ont été examinées dans des contextes où le métabolisme des nucléotides est reprogrammé, notamment en biologie du cancer et dans des affections associées à un défaut de maintenance de l’ADN.
DTYMK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DTYMK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DTYMK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DTYMK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DTYMK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.