Plasmide Double Nickase (h) DRP1: sc-400459-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DRP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DRP1 Double Nickase (h) et le plasmide DRP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DNM1L. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DRP1 Antibody (C-5): sc-271583
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DRP1 | sc-400459-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DRP1 | sc-400459-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNM1L code la dynamine apparentée 1 (DRP1), une grande GTPase qui orchestre la fission mitochondriale en s’assemblant sur la membrane externe de la mitochondrie et en provoquant la constriction des membranes en coordination avec des protéines adaptatrices telles que FIS1, MFF et MID49/51. En régulant l’architecture du réseau mitochondrial, DRP1 influence la phosphorylation oxydative, la gestion des espèces réactives de l’oxygène, la répartition de l’ADN mitochondrial et le contrôle qualité des organites via la mitophagie. Les dynamiques dépendantes de DRP1 sont étroitement couplées à la signalisation de l’apoptose et à l’adaptation métabolique, reliant l’activité de DNM1L aux voies qui gouvernent les réponses au stress cellulaire et l’homéostasie bioénergétique. Une fonction dérégulée de DRP1 et la fragmentation mitochondriale sont associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, à des dysfonctionnements cardiométaboliques et à des programmes de survie des cellules cancéreuses, faisant de DNM1L une cible fréquente des études mécanistiques en biologie mitochondriale.
DRP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNM1L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNM1L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNM1L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNM1L.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.