Plasmide Double Nickase (h) Drebrin: sc-403241-NIC

DBN1 code la drebrine, une protéine liant l’actine enrichie dans les neurones, qui régule le remodelage du cytosquelette, la dynamique des cônes de croissance et la morphologie des épines dendritiques. La drebrine module l’organisation des filaments d’actine et relie la signalisation synaptique à la plasticité structurelle via des voies contrôlant l’adhésion cellulaire, la croissance des neurites et l’assemblage de la densité post-synaptique. Des altérations de l’expression de DBN1 et de la localisation de la drebrine ont été associées à des changements de la stabilité synaptique et du fonctionnement des circuits, avec des liens rapportés à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs. En contexte non neuronal, la drebrine contribue également à des processus dépendants de l’actine tels que la formation de protrusions membranaires et la motilité cellulaire, ce qui soutient l’étude plus générale de la régulation du cytosquelette.

Drebrin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DBN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DBN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DBN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DBN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.