Plasmide CRISPR/Cas9 KO DRAK2 (h): sc-404787

Présentation

STK17B code pour DRAK2, une sérine/thréonine kinase de la famille des kinases associées à la mort cellulaire (death-associated protein kinases), qui module les seuils de signalisation dans les cellules immunitaires. DRAK2 est impliquée dans la régulation de l’activation dépendante du récepteur des lymphocytes T (TCR), la dynamique de la signalisation du Ca2+ et les programmes transcriptionnels en aval qui orientent la prolifération, les réponses cytokiniques et la survie. Par ces fonctions, elle contribue au contrôle de l’apoptose et des réponses au stress cellulaire, en s’intégrant à des voies qui influencent l’homéostasie immunitaire et l’inflammation. Des altérations de l’activité ou de l’expression de STK17B ont été associées à une dérégulation immunitaire et à des contextes de maladies inflammatoires, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour des études mécanistiques en biologie des leucocytes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DRAK2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STK17B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STK17B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STK17B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DRAK2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STK17B pour l'étude de la signalisation de DRAK2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STK17B essentiels à la fonction de DRAK2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STK17B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DRAK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DRAK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STK17B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DRAK2 plasmide HDR (h) et le DRAK2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STK17B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STK17B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.